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A Method for high-frequency hetero-fusions of Porphyra yezoensis proplasts with Enteromorpha compressa or Monostroma nitidum proplasts


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Title: A Method for high-frequency hetero-fusions of Porphyra yezoensis proplasts with Enteromorpha compressa or Monostroma nitidum proplasts
Other Titles: ヒラアオノリ及びヒトエグサのプロトプラストとスサビノリのプロトプラストとの高頻度異種融合の方法について
Authors: Uppalapati, S.R / Morita, Teruo / Fujita, Yuji
Authors (alternative): ウパラパテイ, S.R / 森田, 晃央 / 藤田, 雄二
Issue Date: Mar-2000
Publisher: 長崎大学水産学部 / The Faculty of Fisheries, Nagasaki University
Citation: 長崎大学水産学部研究報告, 81, pp.49-54; 2000
Abstract: Low hetero-fusion frequencies between Porphyra yezoensis and Enteromorpha compressa or P. yezoensis and Monostroma nitidum protoplasts were observed when these protoplasts were fused following either of electrofusion or polyethylene glycol (PEG) mediated fusion methods. Pretreatment of protoplasts with actinase E (0.15%, 22℃ for 1h) enhanced hetero-fusion frequency following both electrofusion and PEG methods. Maximum hetero-fusion frequencies were 7-8% when P. yezoensis and E. compressa protoplasts were treated with actinase E and electrically fused. Electrofusion was optimally achieved when protoplasts were aligned at 25V (AC) for 20s and induced to fuse by a DC pulse of 250V for 25 μs. Electrofusion method was found not suitable for hetero-fusions between P. yezoensis and M. nitidum protoplasts; hetero-fusion frequencies were low (1-2%) although these protoplasts were treated with actinase E before electrofusion. Higher voltages to increase heterofusion frequency resulted in lysis of protoplasts. These difficulties were attributed to the differences in protoplast size of the fusion partners. PEG mediated fusion overcame these difficulties. Maximum hetero-fusion frequencies were 6-7% when P. yezoensis and M. nitidum protoplasts were treated with actinase E prior to PEG mediated fusion. / スサビノリとヒラアオノリ,スサビノリとヒトエグサとの組み合わせで各々のプロトプラストを電気融合法またはポリエチレングリコール(PEG)法で融合したが,いずれの場合も融合の頻度は低かった。そこで,各プロトプラストをアクチナーゼE (0.15%, 22℃, 1時間)で前処理すると,電気融合法,PEG法のいずれの場合も異種融合頻度は高くなった。アクチナーゼE処理したスサビノリとヒラアオノリとの電気融合は,最高値7~8%となった。この電気融合率の最適条件は,高周波電圧(AC) 25V, 20sの印加によってチェーンが形成され,パルス電圧(DC) 250V, 20μsの印加によって融合が誘導された。電気融合法によるスサビノリとヒトエグサのプロトプラストの異種融合では,アクチナーゼEで前処理したプロトプラストの融合であっても,融合頻度は1~2%と低く,電気融合法が適さないことが分かった。異種融合の頻度を増すために,より高いパルス電圧をかけると,プロトプラストは破壊してしまった。これらの問題は,二種類のプロトプラストの大きさの違いによるものである。これらの問題を解決するために,スサビノリとヒトエグサとのあいだで,PEGによる異種融合を行うと,融合頻度は高くなった。アクチナーゼE処理したスサビノリとヒトエグサのプロトプラストの異種融合頻度は,PEG法によって最高値6~7%となった。
Keywords: electrofusion / Enteromorpha / fusion frequency / hetero-fusion / Monostroma|polyethylene glycol / |Porphyra / protoplasts
URI: http://hdl.handle.net/10069/29716
ISSN: 05471427
Type: Departmental Bulletin Paper
Text Version: publisher
Appears in Collections:第81号

Citable URI : http://hdl.handle.net/10069/29716

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