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NAOSITE : Nagasaki University's Academic Output SITE > Institute of Tropical Medicine > Bulletin > Tropical medicine > Volume 29, No. 3 >

精製日本脳炎ウイルスからTriton X-100処理によって得られた血球凝集活性を有する外被膜糖タンパクV3(E)分画


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Title: 精製日本脳炎ウイルスからTriton X-100処理によって得られた血球凝集活性を有する外被膜糖タンパクV3(E)分画
Other Titles: Preparation of Envelope Glycoprotein V3 (E) Fraction Associated with Haemagglutinating Activity from Purified Japanese Encephalitis Virus by Triton X-100 Treatment
Authors: Srivastava, A. K. / 五十嵐, 章
Authors (alternative): Srivastava, Ashok Kumar / Igarashi, Akira
Issue Date: 30-Sep-1987
Publisher: 長崎大学熱帯医学研究所 / Institute of Tropical Medicine, Nagasaki University
Citation: 熱帯医学 Tropical medicine 29(3). p127-137, 1987
Abstract: 精製された日本脳炎(JE)ウイルス粒子を中性表面活性剤Triton X-100 (TX-100)処理した後に庶糖密度勾配遠心法によりウイルス粒子の外被膜糖タンパクV3(E)を含む分画が得られた.ウイルスタンパク当り1.3-75mgのTX-100で処理するとウイルス粒子は破壊され,ウイルスのELISA抗原はTX-100非処理の対照ウイルス粒子よりも庶糖密度勾配遠心法により遅く沈降するピークを形成した.ウイルスタンパクに対するTX-100の比率が大きいほど,破壊されたウイルス抗原の沈降速度は小さくなった。このウイルス抗原のピークにはJEウイルスの血球凝集活性が存在しており,ドデシル硫酸ソーダ存在下のポリアクリルアミドゲル電気活動およびウエスタンブロット法ではこの分画にはJEウイルス構造タンパクのうちのV3(E)のみが認められた.ネガティブ染色した電子顕微鏡試料では,高濃度のTX-100処理によって得られたELISA抗原には7-8nmの単位構成要素から成る30-40nmの凝集塊が観察され,低濃度のTX-100処理では10-15nmの単位構成要素から成る240nm以上の凝集塊が観察された.これに対してTX-100非処理の対照ウイルス試料には直径40-45nmの球型粒子が認められた. / Fractions containing envelope glycoprotein V3(E) was prepared from purified Japanese encephalitis (JE) virus by treating with neutral detergent, Triton X-100 (TX-100), followed by ultracentnfugation through sucrose gradients. When virion was mixed with 1.3 to 75mg of TX-100/mg protein of the virus, the virion was disrupted and virus ELISA antigen formed a peak in the gradients sedimenting slower than the control virion. The higher ratio of TX-100 to the vims protein resulted in the slower sedimentation of the disrupted virus antigen. The ELISA antigen peak was associated with haemagglutinating activity (HA) and contained V3(E) of JE virus structural proteins as revealed by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) followed by the Western blotting. Electron microscopy with negatively stained specimens showed that the ELISA antigen fraction prepared with high concentration of TX-100 contained unit particles between 7-8nm forming aggregagtes between 30-40nm, while the fraction prepared with low concentration of TX-100 contained unit particles of 10-15 nm forming larger aggregates about 240nm. On the other hand, control virion showed spherical particles between 40-50nm in diameter.
URI: http://hdl.handle.net/10069/4497
ISSN: 03855643
Type: Departmental Bulletin Paper
Appears in Collections:Volume 29, No. 3

Citable URI : http://hdl.handle.net/10069/4497

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